어떤 drug-selection marker를 사용해야 하나요?
VectorBuilder는 puromycin (Puro), neomycin (Neo), hygromycin B (Hygro) 및 blasticidin (Bsd) 등 다양한 drug-selection marker를 제공합니다. 내부 데이타에 의하면 일반적으로 puromycin이 다른 항생제보다 더 빠르고 지속적으로 non-resistant cells을 죽이는 것으로 알려졌습니다. 이러한 이유로 VectorBuilder는 대부분의 세포 타입에 대해 Puro를 추천합니다. 그러나 일부 세포 타입은 resistance gene 없이도 특정 항생제에 어느 정도 내성이 있거나, resistance gene이 있어도 특정 항생제에 민감하게 반응하는 경우도 있습니다. 이와 같은 세포들은 최적의 마커를 찾기 위해 다양한 drug-selection markers에 대한 테스트가 필요합니다.
일반적으로 사용되는 항생제의 권장 농도 및 선택 기간
Antibiotics | Cell line | Recommended concentration | Recommended duration |
---|---|---|---|
Puromycin | 293T | 1-2 ug/ml | 3-5 days |
Geneticin (G418) | HT1080 | 500-1000 ug/ml | 7-11 days |
Blasticidin | 293T | 5-15 ug/ml | 7-11 days |
Hygromycin B | 293T | 100-200 ug/ml | 5-7 days |
Note:
a. Geneticin (G418)은 neomycin resistance gene을 발현하는 세포를 선택하는데 사용됩니다..
b. Passaging 세포는 종종 blasticidin 선택을 가속화할 수 있습니다.
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