IVT circRNA
Circular RNA (circRNA)는 capping이나 poly(A) tail이 필요하지 않고 변경된 분해 동역학으로 인해 선형 mRNA에 비해 장기간 도입유전자 발현을 나타내는 covalently closed single-stranded RNA 입니다. 이러한 특성을 갖는 IVT circRNA는 백신, 유전질환 치료 및 면역 시스템 조절을 포함한 치료제 응용분야를 위해 빠르게 개발되고 있습니다. VectorBuilder는 다양한 스케일의 커스텀 circRNA 생산을 전문으로 합니다.
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중점 사항
코딩 영역 및 IRES에 대한 독자적인 서열 최적화
높은 수율, 순도, 발현율을 갖춘 circRNA 전달을 위한 전문 디자인 및 생산팀
종합적인 QC 패널
세부 사항
- Premade circRNA 제품
- Therapeutic RNA 개발: IVT 벡터 디자인 및 클로닝, IVT RNA 생산 및 정제.
- LNP Encapsulation: 표준 및 커스텀 formulations, antibody-conjugated LNP.
- CDMO 서비스: 공정 개발, GMP 제조, fill/finish.
기술적인 정보
circRNA cyclization 및 번역
VectorBuilder는 Group I permuted intron-exon (PIE) self-splicing 기술을 기반으로 고수율, 고순도 circRNA 생성을 위한 최적화된 생산 플랫폼을 개발했습니다(Figure 1 ). 이 메커니즘에 의한 circRNA의 생성은 불순물과 scar 서열을 최소화합니다. circRNA의 번역은 IRES 의존적입니다. IRES는 ribosome을 모집하여 5' 말단과 관계없이 전사체에서 내부적으로 번역을 시작합니다.
Figure 1. Mechanism of circRNA self-splicing and generation in vitro. The translation of circRNA is IRES dependent.
실험 데이터
Figure 2. circRNA encoding EGFP was transfected into HEK293T cells and exhibited long-term expression compared to traditional mRNA.
Figure 3. Gel electrophoresis analysis of precursor and circular EGFP RNA (circRNA-EGFP) after incubation with varying concentrations of RNase A as indicated above. RNase A will digest all linear but not circular RNA.
다양한 유형의 IVT RNA 비교
| mRNA | circRNA | saRNA | |
|---|---|---|---|
| Structure | Linear; usually contains 5’ cap, 5’ UTR, ORF for GOI, 3’ UTR, and poly(A) tail | Circular; usually contains IRES and ORF for GOI | Linear; usually contains 5’ UTR, ORFs for replicase genes and GOI, 3’ UTR, and poly(A) tail |
| Cap | Requires 5’ Cap for stability and ribosome recruitment | No Cap; relies on IRES for ribosome recruitment | Requires 5’ Cap for stability and ribosome recruitment |
| RNA length (nt) | 100 ~ 10,000 | 1000 ～ 5000 | 7000 ~ 10,000 |
| Stability | Low | High | Low |
| Can modified nucleotides be added in production? | Yes | No | Yes |
| Expression level | Low | Medium | High |
| Expression duration | Short | Medium | Long |
| Immunogenicity | Low | Medium | High |
