포유류 단백질 발현

VectorBuilder는 포유류 세포에서 재조합 단백질을 생산하는데 있어 광범위한 전문 지식을 제공합니다. 포유류 재조합 단백질 발현 시스템은 표적 단백질이 가장 자연적인 상태로 발현될 수 있도록 하여 치료용 단백질, 백신 및 항체를 생산하는데 선호되는 접근 방식입니다. 당사는 최적화된 일시적 형질감염 플랫폼을 사용하여 HEK293 세포 또는 별도 요청시 CHO 세포에서 재조합 단백질을 생산하여 제공합니다.

중점 사항

  • 적절한 폴딩을 갖는 가장 native 상태의 진핵생물 단백질
  • 필요한 post-translational modification 포함
  • Transient 단백질 발현 및 stable cell line 제작 서비스 모두 가능

서비스 세부 사항

 Mammalian_Protein_Expression_Service

가격 및 소요시간 Price Match
Service Module Brief Description Deliverables Price (USD) Turnaround
Vector design and cloning Our vector design includes fusion partner selection, purification tag selection, and codon optimization. This is followed by gene synthesis and cloning into the mammalian protein expression vector. E. coli glycerol stock From $160 1-2 weeks
Pilot-scale expression and purification Mammalian cells, such as HEK293 cells, will be transfected. If feasible, 0.1-0.5 mg of purified target proteins * can be produced, and quality control (QC) will be performed.
  • 0.1-0.5 mg purified proteins (if feasible)
  • COA
From $1,800 3-4 weeks
Production-scale expression and purification Scaled up production of >100 mg of purified proteins.
  • Up to 100+ mg purified proteins
  • COA
Please inquire

* 정제 방법은 컨스트럭트 디자인 및 단백질 특성에 따라 결정됩니다. 

배송 및 보관

대부분의 재조합 단백질은 드라이아이스에 냉동 상태로 전달됩니다. 수령 후 멸균 상태에서 -20°C ~ -80°C에 보관해야 합니다. 재조합 단백질은 적절하게 보관할 경우 일반적으로 최대 1년 동안 안정성을 유지합니다. 또한 수령 후 재조합 단백질을 분주하여 저장하는 것을 권장하며, 동결-해동 반복은 피하시기 바랍니다.

품질관리 (QC)

VectorBuilder에서 클로닝된 모든 벡터는 100% 서열을 보증합니다. VectorBuilder가 생산하는 모든 재조합 단백질은 엄격한 품질관리를 받습니다. 대부분의 시스템에 대한 기본 QC에는 1) 제한효소 절단 분석 및 Sanger 시퀀싱을 통한 단백질 발현 벡터의 검증, 및 2) A260/280 측정 및 SDS-PAGE에 의한 단백질 농도 및 순도 측정이 포함됩니다. 일반적인 추가 QC 서비스는 아래 표에 나와 있으며 별도 요청시 제공될 수 있습니다.

Additional QC services Method
Endotoxin test LAL
Protein characterization Western Blot
Intact MS (reduced)
SEC-HPLC
SEC-MALs
Protein N-terminal sequencing
Host cell protein test
Tag removal Protease digestion
Kinetics and affinity analysis Octet
Biacore
Pathogen testing panel for rodents

기술적인 정보

벡터 시스템

포유류 발현 벡터 시스템에 대해서는 벡터 가이드를 참조 하세요..

사례 연구
Mammalian protein expression QC

Figure 1. HEK293 세포에서 생산된 재조합 단백질의 특성 분석. (A) SDS-PAGE 분석은 재조합 단백질의 분자 질량을 보여주며 순도는 ≥ 95%로 확인되었습니다. (B) 순도는 SEC-HPLC에 의해 ≥ 90%로 확인되었습니다. (C) 재조합 단백질의 생물학적 활성은 antibody binding assay로 측정되었습니다.   EC50은 0.6~2.0 ng/ml입니다..

주문 방법

고객이 제공하는 벡터

고객이 제공하는 시료가 필요한 경우 시료 제출 가이드라인에 따라 준비하여 VectorBuilder로 보내주십시오. 시료의 배송 지연이나 손상을 방지하기 위해 당사의 가이드라인을 엄격히 따라 시료를 준비해 주시기 바랍니다. 고객이 제공하는 모든 시료는 VectorBuilder의 필수 QC를 거치며, 각 항목에 대해 $100의 추가 요금이 부과될 수 있습니다. 고객이 제공한 시료가 QC를 통과해야만 생산을 시작할 수 있습니다.

FAQ

어떤 재조합 단백질 발현 시스템을 선택해야 합니까?

프로젝트에 가장 적합한 시스템을 선택할 때 모든 재조합 단백질 발현 시스템은 고려해야할 장단점이 있습니다. 아래 표에는 각 시스템의 장단점이 요약되어 있습니다.

Recombinant protein expression system Pros Cons
Bacterial
  • Cost-effective
  • Short production time
  • Technically simple
  • Can be scaled up easily
  • High protein yield
  • Proteins lack post-translational modifications
  • Codon usage is different from that of eukaryotes
  • Difficult to express certain proteins due to the accumulation of inclusion bodies
  • Some proteins are toxic and can inhibit bacterial growth
Mammalian cells
  • Produces proteins in their most natural state with all necessary post-translational modifications and proper folding
  • Suitable for secretory and membrane proteins
  • Most appropriate for producing therapeutic proteins
  • Long production time
  • Requires complex growth conditions
  • Scaling up can be difficult
  • Not suitable for intracellular proteins due to low yield
Insect
  • Performs majority of complex post-translational modifications and protein folding
  • Suitable for secretory, intracellular, and membrane proteins
  • Can be used for producing large protein complexes
  • High levels of protein expression compared to other eukaryotic expression systems
  • Highly scalable due to high-density, suspension cell cultures
  • Long production time
  • Requires complex growth conditions
  • Technically challenging
Cell-free system
  • Time-efficient synthesis completed in 3 hours
  • No need for live cells in the production of toxic, complex, or unstable proteins
  • Suitable for high-throughput protein expression and screening
  • Easy procedure compatible with automated processes
  • Easy to optimize the conditions
  • Limited modifications are available
어떤 단백질 태그를 사용해야 하나요?

태그는 재조합 단백질 생산에 자주 활용됩니다. 태그는 정제 과정을 간소화하고, 특정 태그에서는 단백질 용해도, 수율 또는 순도가 향상되는 것으로 나타났습니다. Protease 절단 부위에 태그가 부착되어 있으면 정제 후 제거가 가능하며, 목적 단백질에 따라 절단 효율이 달라집니다. 적절한 태그를 신중하게 선택하는 것은 다운스트림 단백질 발현 및 정제에 매우 중요합니다. 아래 표에는 일반적으로 사용되는 태그의 개요와 장점 및 제한사항이 정리되었습니다.

Tag Commonly applied system Advantages Limitations
GST Bacteria, insect
  • Largely preserve the native structure of the protein
  • Enables protein purification under mild conditions
  • Easy cleavage
  • Enhances the solubility and expression of the protein
  • Large tag size
  • Dimerization may impact the target protein
  • Not suitable for purifying proteins under denaturing conditions
His All
  • Small tag size, therefore less impact on the protein
  • Low cost for metal-affinity chromatography
  • Low immunogenicity
  • Suitable for purifying proteins under denaturing conditions
  • Other endogenous metal-binding proteins in microbial hosts may be co-purified, therefore optimization is usually required
  • Does not facilitate protein folding and solubility
SUMO Bacteria, insect
  • Facilitates protein folding
  • Enhances the solubility and expression of the protein
  • May undergo non-specifically cleavage by other bacterial proteins
  • Not suitable for purifying proteins under denaturing condition
Flag Mammalian cells, insect
  • Small tag size, therefore less impact on the protein
  • Easy detection
  • Low non-specific binding
  • Poor efficacy for purification
MBP Bacteria, insect
  • Enhances the solubility and expression of the protein
  • Large tag size
  • Not suitable for purifying proteins under denaturing conditions
Fc Mammalian cells, insect
  • Enhances the solubility and expression of proteins
  • Suitable for secreted protein
  • Large tag size

For more information regarding tags, please visit protein tags.

단백질 발현을 위해 HEK293 또는 CHO 세포를 사용해야 합니까?

Transient transfection의 경우 HEK293 (Human Embryonic Kidney 293)을 첫번째 선택으로 권장합니다. HEK293 세포는 시간과 비용을 절약할 수 있는 체계적이고 효율적인 절차를 통해 쉽게 transfection될 수 있습니다. 또한 HEK293 세포는 R&D 실험실에서 쉽게 계대배양되고 유지되며 높은 수준의 단백질 발현을 나타냅니다..

대조적으로, CHO (Chinese Hamster Ovary) 세포는 transfection에 도전이 있을 수 있습니다. 그러나 CHO 세포는 바이오의약품 산업, 특히 치료용 항체 또는 단백질 생산에 더 적합합니다. 바이오치료제의 70% 이상이 이 세포주를 사용하여 제조됩니다.