MMLV 레트로바이러스 (MMLV Retrovirus Packaging)

재조합 Moloney murine leukemia virus (MMLV) 레트로바이러스 벡터는 다양한 분열하는 세포에 유전자를 영구적으로 도입하는 효율적인 바이러스 벡터입니다. 이 레트로바이러스 시스템은 iPS 세포 생성을 위한 유전자 전달에 있어서 탁월한 방법이 되고 있습니다.

VectorBuilder는 특별히 벡터 클로닝 서비스에서 사용되는 MMLV 벡터 시스템을 위해 titer, 순도, 생존력 및 일관성 측면에서 재조합 MMLV 레트로바이러스 생산 프로토콜을 크게 개선한 자체의 기술과 시약을 개발해왔습니다. 그 결과 고객의 MMLV 벡터 클로닝과 MMLV 패키징에 대한 요구를 만족시킴으로써 당사에 반복적으로 의뢰하는 고객들이 점점 많아지고 있습니다. 

제공되는 MMLV 레트로바이러스 유형
  • VSV-G pseudotype된 MMLV 레트로바이러스
  • VSV-G pseudotype된 self-inactivating MMLV 레트로바이러스

서비스 세부 사항

가격 및 소요 시간
Scale Application Titer Volume Price (USD) Turnaround
Pilot Cell culture >107 TU/ml 250 ul (10x25 ul) $399 8-16 days
Medium 1 ml (10x100 ul) $599
Large >108 TU/ml 1 ml (10x100 ul) $999
Ultra-purified large Cell culture & in vivo >108 TU/ml 1 ml (10x100 ul) $1,599

TU = Transduction units (aka infectious units)

결과물
For non-ultra-purified scales For ultra-purified scales
Your custom MMLV retrovirus Your custom MMLV retrovirus

Free: control virus

  • Pilot: >107 TU/ml, 100 ul
  • Medium: >107 TU/ml, 2x100 ul
  • Large: >107 TU/ml, 2x100 ul

  Add-on purchase (optional): ultra-purified control virus

  • Ultra-purified large: >108 TU/ml, 10x100 ul, at $539
Free: Polybrene (5 mg/ml, 200 ul) Free: Polybrene (5 mg/ml, 200 ul)
Control 바이러스

Control 레트로바이러스 벡터는 맞춤형 바이러스의 생물학적 응용과 일치하도록 디자인되어, 레트로바이러스 transduction을 테스트하는데 사용됩니다. 예를 들어 맞춤형 바이러스가 유전자를 과발현하는 경우, 제공되는 control 바이러스는 EGFP control 레트로바이러스 (EGFP 과발현 MMLV 레트로바이러스) 입니다. Control 바이러스에 대한 자세한 정보는 다음과 같습니다.

벡터 시스템 Control 바이러스 벡터 이름 Control 바이러스 벡터 ID
MMLV 유전자 발현 시스템 pMMLV[Exp]-EGFP/Puro VB010000-9307ddn
Self-inactivating MMLV 유전자 발현 시스템 pMMLV-SIN[Exp]-CMV>EGFP:T2A:Puro VB010000-9417hez
배송 및 보관

MMLV 레트로바이러스는 HBSS buffer에 용해 후 얼려서 드라이아이스와 함께 배송됩니다. 수령 즉시 장기보관을 위해 (최소 6개월 이상 안정) -80℃에서 보관해야 하며, 일주일 이내에 사용시에는 -20℃에 보관하여야 합니다.  MMLV 레트로바이러스의 유통기한은 약 1년입니다. MMLV 레트로바이러스의 반복적인 동결-융해는 심각한 titer 감소를 초래할 수 있기 때문에 피하여야 합니다.

기술적인 정보

MMLV 레트로바이러스 생산 및 QC

MMLV 레트로바이러스 제조하기 위하여 목적 유전자(GOI)를 운반하는 transfer 벡터는 당사 소유의 VSV-G를 인코딩하는 envelope 벡터와 Gag 및 Pol을 인코딩하는 패키징 벡터와 함께 패키징 세포에 co-transfection 됩니다. 단기간 배양 후 상청액을 채취하고 원심분리하여 세포 이물질을 제거한 후 여과합니다. 바이러스 입자는 이후 PEG에 의하여 농축됩니다. Ultracentrifuge를 사용하여 MMLV 레트로바이러스를 정제하는 경우 (in vivo grade), 바이러스 입자를 sucrose cushion ultracentrifugation으로 더욱 정제하고 농축합니다. 당사는 qPCR 기반의 방법을 사용하여 MMLV의 기능적 titer를 측정합니다.

MMLV-img

VectorBuilder에서 생산되는 각 재조합 MMLV 레트로바이러스에 대한 품질관리에는 titer 측정, 박테리아 및 fungi에 대한 무균 테스트, mycoplasma 검출 등이 있습니다. Transfer 벡터가 형광 단백질을 인코딩하는 경우, 해당 형광을 검출하기 위해 transduction 테스트를 수행합니다. 추가로 ultracentrifuge에 의해 정제된 MMLV의 경우, 일반적으로 endotoxin 수준를 체크하기 위해서 endotoxin 분석을 수행합니다.

주문 방법

벡터 제작과 바이러스 패키징을 함께 주문하는 경우
고객의 벡터를 사용하여 바이러스 패키징을 주문하는 경우

고객이 제공하는 벡터가 필요한 경우 "시료 제출 가이드라인" 에 따라서 벡터를 보내주시기 바랍니다. 배송 지연이나 시료 손상을 방지하기 위해 당사의 가이드라인을 엄격히 따라 주시기 바랍니다. 모든 고객이 제공하는 시료는 VectorBuilder에 의해 의무적으로 QC를 거치며 각 품목에 대해 $100의 추가 요금이 부과될 수 있습니다. 고객이 제공한 시료가 QC를 통과할 때까지는 생산을 시작할 수 없음을 유의하시기 바랍니다.

자주 묻는 질문

다른 바이러스 벡터들과 비교할 때 MMLV 레트로바이러스만의 특징은 무엇입니까?
렌티바이러스 MMLV 아데노바이러스 AAV
Tropism (친화성) 넓음 넓음 어떤 세포들에는 비효율적임 바이러스 serotype (혈청형)에 따라서 다름
분열을 하지 않는 세포에 감염이 가능한가? 가능함 가능하지 않음 가능함 가능함
호스트 유전체에 안정한 결합을 하는가 아니면 단기적인가? 호스트 유전체에 안정한 결합 호스트 유전체에 안정한 결합 단기적, episomal 단기적, episomal
최대 titer 높음 중간 매우 높음 높음
맞춤형 promoter 가능함 가능하지 않음 가능함 가능함
주요 용도  세포 배양과 in vivo 세포 배양과 in vivo In vivo In vivo
In vivo에서의 면역반응 낮음 낮음 높음 매우 낮음
VectorBuilder에서는 바이러스 titer와 소요 시간을 어떻게 보장합니까?

당사에 의하여 보장되는 titer는 패키징 되는 5’ MoMuLV LTR에서 3’ MoMuLV LTR의 영역이 MMLV cargo limit (8 kb) 이하일 때 적용됩니다. 그 이상의 경우 벡터가 바이러스로 패키징 될 수는 있지만 titer 감소가 일어날 수 있습니다. 또한 다음과 같은 벡터들의 경우 titer를 보장해드릴 수 없습니다:

  • Proapoptotic 유전자와 같이 숙주 세포에 대한 독성을 나타낼 수 있는 유전자들, 세포막 단백질과 같이 세포들이 응집하게 만들어서 세포나 바이러스의 integrity를 손상시킬 수 있는 유전자들과 같이 패키징 과정에 유해한 작용을 할 수 있는 서열들이 포함되어 있거나, 반복 서열 또는 GC 함량이 매우 높아서 재배열이나 2차 구조를 만들 가능성이 높은 서열을 포함하는 벡터들;
  • 고객이 제공한 plasmid에 패키징 효율에 불확실성을 제공할 수 있는 공개되지 않은 서열이나 일반적이지 않은 MMLV functional element (e.g. LTR) 를 포함하는 경우.

예상 소요 시간은 제조 시작부터 완료까지의 시간을 의미합니다. 고객이 제공한 시료 (template DNA나 바이러스 벡터 등)의 운송 시간과 QC, 최종 결과물을 고객에게 배송하기 위한 운송 시간은 포함되지 않습니다.