miniVec™ Plasmid

Figure 3. 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid를 이용한 일시적 유전자 발현 비교. HEK293T 세포에 EGFP를 암호화하는 동일 몰 농도의 miniVec™ plasmid 또는 기존 plasmid를 transfection 시켰습니다. Transfection 48시간 후 flow cytometry와 대표적인 형광 현미경 이미지를 통해 EGFP 발현을 측정하였습니다. mCherry 발현 plasmid를 transfection 대조군으로 co-transfection 하였습니다. 모든 생존 세포의 평균 형광 강도 (MFI)를 계산하였습니다.

Figure 4. 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid를 사용한 렌티바이러스 패키징 비교. (A) miniVec™ packaging plasmid를 사용한 경우, 동일한 패키징 스케일의 기존 plasmid보다 더 높은 기능적 역가 (qPCR 기반)를 달성했습니다. (B) 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid를 사용하여 병렬 생산한 렌티바이러스의 동일 부피 형질도입을 통해 HEK293T 세포에서 EGFP 발현을 비교했습니다. 모든 생존 세포의 평균 형광 강도 (MFI)를 계산했습니다.

Figure 5. 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid의 transposition 효율 비교. HEK293T 세포에 (A) piggyBac 또는 (B) Sleeping Beauty 시스템을 이용하여 EGFP를 암호화하는 기존 plasmid 또는 miniVec™ plasmid를 동일 몰 조건에서 transfection 시켰습니다. 계대 초기와 계대 후기에 해당 대조군 샘플 (표시하지 않음)의 형광이 거의 남아 있지 않을 때 대표적인 형광 이미지를 촬영하였고 flow cytometry 분석을 통해 평균 형광 강도를 측정하였습니다.

Figure 6. 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid를 이용한 CRISPR-매개 EGFP knockin 비교. HEK293T 세포에 기존 또는 miniVec™ 기반 hCas9과 EGFP를 발현하는 donor plasmid를 동일 몰 농도 조건에서 transfection시켜 HITI (homology-independent targeted insertion)를 통한 AAVS1 locus에서의 EGFP 유전체 통합 효율을 조사했습니다. 대조군 샘플에서 무시할 수 있는 형광이 남을 때까지 지정된 시점에서 flow cytometry를 이용하여 세포의 평균 형광 강도를 측정했습니다(표시하지 않음).

Figure 7. in vivo 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid의 형질전환 유전자 발현 비교. 동일 몰 plasmid (CAG>Luc2)를 마우스에 (A) intravenous 또는 (B) intramuscular 주사로 투여했습니다. Luciferase 발현은 표시된 시점에서 측정했습니다.

Figure 8. COVID-19 스파이크 단백질을 발현하는 기존 plasmid와 miniVec™ plasmid 간의 naked DNA 백신 접종에 대한 면역 반응 비교. BALB/c 마우스에 기존 백신 또는 miniVec™ 기반 백신, 음성 대조군 (PBS), 또는 vehicle 대조군 (empty기존 plasmid 또는 miniVec™ plasmid)을 2주 간격으로 3회 동일 몰 용량으로 근육 주사하였습니다. (A) 각 주사 후 2주 후에 다음 면역 접종 전에 동물에서 채혈한 혈액에서 특이 항체 역가를 측정하였습니다. 42일째에 비장세포를 채취하였고, 비장세포의 배양 상층액을 사용하여, (B) 스파이크 단백질 자극 시 총 IFN-γ 분비량을 측정하였습니다.