Inducible Gene Expression Solutions

VectorBuilder는 tetracycline-regulated 유전자 발현을 달성하기 위한 2세대 3세대 Tet inducible 유전자 발현 시스템 시약의 포괄적인 컬렉션을 제공한다. 실험 목적에 맞게 non-viral, viral 및 transposon backbone이 갖는 광범위한 pre-made 및 custom-made 벡터를 제공한다. 모든 주요 바이러스 유형 (예: lentivirus, AAV, adenovirus)을 다양한 titer 스케일로 패키징하여 Tet 시스템 컴포넌트를 transfection이 어려운 세포에 전달할 수 있다. 또한 tetracycline 또는 그 유사체 (예: doxycycline)에 의한 관심 유전자 (GOI)의 효율적이고 신뢰할 수 있는 유도를 위해 Tet inducible gene expression stable cells line을 제조할 수 있다.

Highlights
  • All-in-one 및 dual 벡터 형태로 제공 가능
  • tTS/rtTA fusion cassette를 진정한 온-오프 스위치로 사용하여 최소한의 누출 발현으로 강력한 유도를 달성
  • 비타겟 조직에서 최소한의 누출 발현이 가능한 low-leak tissue-specific 벡터
  • 100% 서열 검증, 빠른 소요시간 및 경쟁력 있는 가격
  • 실험 설계, 데이터 분석 및 문제 해결을 위한 강력한 기술 지원
Offering Details
  • Custom Tet vectors
  • Popular Tet vectors
  • Virus packaging for Tet vectors
  • Tet inducible gene expression stable cell lines
Technical Information
  • Tetracycline inducible gene expression
  • All-in-one vs. dual vector design
  • Tissue-specific Tet inducible gene expression

Offering Details

Custom Tet vectors

VectorBuilder는 tetracycline inducible gene expression cassettes를 타겟 세포로 효율적으로 전달하기 위한 다양한 맞춤형 벡터를 제공한다. 매우 직관적인 온라인 벡터 디자인 플랫폼을 사용하여 다양한 벡터 backbone (non-viral, viral 또는 transposon) 컬렉션과 벡터 컴포넌트 (promoters, ORFs, fluorescent 및 drug-selection markers)의 무제한 조합에서 선택하여, GOI의 Tet regulated 발현을 달성하기 위한 맞춤형 벡터를 디자인할 수 있다.

Plasmid DNA preparation 및 바이러스 패키징은 custom Tet 벡터를 shopping cart에 추가하고 downstream 서비스에서 구매할 수 있다.

Design tips 
  • TRE driven GOI expression vector and Tet regulatory protein expression vector are NOT all-in-one Tet vectors. To achieve Tet regulated gene expression, you need the expression of both your GOI driven by TRE promoter and Tet regulatory protein in your cells of interest.
  • In the 2nd generation Tet system, TRE promoter is used and it can interact with Tet regulatory proteins such as rtTA, tTS and tTA. In the 3rd generation Tet system, TRE3G promoter is used and the corresponding Tet regulatory protein is Tet3G.
  • When designing a dual vector system, select two different markers for TRE driven GOI expression vector and Tet regulatory protein expression vector. If your experimental system already contains a marker (e.g. cells of interest expressing an antibiotic resistant gene), check for its compatibility with the markers on your Tet vectors.
Choose your custom Tet vectors View more
Click to view detailed information on our vector construction services
Popular Tet vectors

VectorBuilder는 all-in-one 및 dual 벡터 형태로 인기있는 Tet 벡터 패널을 제공한다. Plasmid DNA preparation 및 바이러스 패키징은 Tet 벡터를 shopping cart에 추가하고 downstream 서비스에서 구매할 수 있다.

아래의 Vector Picker를 사용하여 인기있는 Tet 벡터를 주문할 수 있다.

Selection tips 
  • TRE driven GOI expression vector and Tet regulatory protein expression vector are NOT all-in-one Tet vectors. To achieve Tet regulated gene expression, you need the expression of both your GOI driven by TRE promoter and Tet regulatory protein in your cells of interest.
  • Select a Tet regulatory protein expression vector for generating stable cell lines expressing tTA, tTS and/or rtTA.

All-in-one (Tet-on)

Note: If you need all-in-one lentiviral vectors or 3rd generation all-in-one Tet vectors, please send us a design request.

TRE driven GOI expression

Tet regulatory protein expression

If you unable to find your desired Tet vectors using the vector pickers above, simply send us a design request describing your needs and our scientists will assist you from there.

Virus packaging for Tet vectors

VectorBuilder는 Tet-inducible 유전자 발현 시스템을 transfection이 어려운 세포에 전달하기 위해 lentivirus, AAV 및 adenovirus에 대한 프리미엄 품질의 바이러스 패키징 서비스를 다양한 스케일로 제공한다. 당사의 독점 기술과 시약은 titer, 순도, 생존력 및 일관성 측면에서 바이러스 패키징 프로토콜을 크게 개선했다. 당사의 패키징 프로토콜은 벡터 제작 서비스에 사용되는 바이러스 벡터 시스템에도 최적화되어 있다. 그 결과 클로닝 및 바이러스 패키징 요구사항에 만족하여 당사에 반복적으로 의뢰하는 고객들이 많아지고 있다.

Price, turnaround and scales of lentivirus packaging services View more
Scale Application Typical Titer Minimum Titer Volume Price (USD) Turnaround
Pilot Cell culture >4x108 TU/ml >108 TU/ml 250 ul (10x25 ul) $399 8-16 days
Medium >3x108 TU/ml 1 ml (10x100 ul) $599
Large >2x109 TU/ml >109 TU/ml 1 ml (10x100 ul) $999
Ultra-purified medium Cell culture & in vivo >2x109 TU/ml >109 TU/ml 500 ul (10x50 ul) $1,299
Ultra-purified large 1 ml (10x 100 ul) $1,599

TU = Transduction units (also known as infectious units)

Price, turnaround and scales of AAV packaging servicesView more
Scale Application Typical Titer Minimum Titer Volume Price (USD) Turnaround
Pilot Cell culture >1012 GC/ml >2x1011 GC/ml 250 ul (10x25 ul) $399 10-18 days
Medium 1 ml (10x100 ul) $599
Large >5x1012 GC/ml >2x1012 GC/ml 1 ml (10x100 ul) $999
Ultra-purified pilot Cell culture & in vivo >2x1013 GC/ml >1013 GC/ml 100 ul (4x25 ul) $1,199 16-26 days
Ultra-purified medium 500 ul (10x50 ul) $1,799
Ultra-purified large 1 ml (10x100 ul) $2,799

GC = Genome copies

Price, turnaround and scales of adenovirus packaging services View more
Scale Application Typical Titer Minimum Titer Volume Price (USD) Turnaround
Pilot Cell culture >2x1010 IFU/ml >1010 IFU/ml 250 ul (10x25 ul) $399 20-32 days
Medium 1 ml (10x100 ul) $599
Large >2x1011 IFU/ml >1011 IFU/ml 1 ml (10x100 ul) $999
Ultra-purified medium Cell culture & in vivo >2x1012 VP/ml >1012 VP/ml 500 ul (10x50 ul) $1,299 22-36 days
Ultra-purified pilot 1 ml (10x100 ul) $1,599

IFU = Infectious units; VP = Virus particles

Click to view detailed information on our virus packaging services

Tet inducible gene expression stable cell lines

VectorBuilder는 최소한의 백그라운드 발현과 GOI의 높은 유도를 갖는 Tet inducible gene expression stable cell line을 맞춤형으로 제작할 수 있다. 또한, 유연한 실험 설계 및 신뢰할 수 있는 유전자 유도를 위해 TRE 구동 GOI를 운반하는 plasmid/virus로 transfection /transduction 할 수 있는 tTS/rtTA expressing cell line을 제조할 수 있다. Stable Tet-On cell line에서 GOI의 유도는 RT-qPCR에 의해 검증된다. 또한 최종 cell line 제품을 출하하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다.

Price and turnaround of our Tet inducible gene expression stable cell line services View more
Stable Cell Line Model Strategy Deliverable Price (USD) Turnaround
tTS/rtTA Expressing Stable Cell Line Lentivirus-based Pooled Cells From $2,199 7-9 weeks
3 Single Clones From $4,199 9-15 weeks
Tet-On Gene Expression Stable Cell Line Lentivirus-based Pooled Cells From $3,599 10-16 weeks
3 Single Clones From $5,899 13-21 weeks

Click here for detailed information on our stable cell line generation services

Technical Information

Tetracycline inducible gene expression

Tetracycline inducible 유전자 발현 시스템은 포유류 세포에서 유전자 발현의 타이밍을 제어하는 ​​강력한 도구이다 (Figure 1). 당사는 Tet-On 및 Tet-Off 시스템을 모두 제공하여 GOI 발현을 매우 특이적이고 tetracycline dose-dependent regulation 되도록 한다.

당사의 2세대 Tet-On 벡터 시스템은 tetracycline이 없을 때 GOI가 거의 완전히 발현되지 않도록 하고, tetracycline을 추가하면 강력하고 신속한 발현을 달성하도록 디자인되었다. 이것은 tetracycline이 없을 때는 tTS 단백질에 의한 active silencing, tetracycline이 있을 때는 rtTA 단백질에 의한 강력한 activation이 되는 멀티컴포넌트 시스템을 통해 달성된다. Tetracycline이 없는 경우, TetR (Tet repressor protein)과 KRAB-AB (transcriptional repressor domain of Kid-1 protein)의 융합에서 파생된 tTS 단백질이 TRE promoter에 결합하여 유전자 전사를 능동적으로 억제한다. 반면에 rTetR (a mutant Tet repressor)과 VP16 (the transcription activator domain of virion protein 16 of herpes simplex virus)의 융합에서 파생된 rtTA 단백질은 TRE promoter에 결합하여 tetracycline이 존재할 때만 유전자 전사를 활성화한다. 당사의 Tet-Off 벡터 시스템은 tTA 단백질과 TRE promoter의 결합에 의해 조절되는 tetracycline의 존재 하에서 타겟 유전자 발현을 억제하는데 사용할 수 있다.

또한 3세대 Tet-On 벡터를 디자인하고 클로닝하여 낮은 수준의 기저 발현을 달성하고 doxycycline에 대한 민감성을 증가시켜 동물 연구에 특히 적합하다. 3세대 시스템에서 타겟 유전자 유도는 Tet3G 단백질이 TRE3G promoter에 결합함으로써 달성된다.

Figure 1. Mechanisms of Tet regulated gene expression using 2nd and 3rd generation Tet vectors. Dox: doxycycline (a tetracycline analog)

Tet inducible 유전자 발현 시스템은 아래 표에 요약된 것과 같이 다른 시스템에 비해 몇가지 장점을 제공하기 때문에 많이 사용되고 있다.

Tet Inducible Gene Expression System Other Inducible Gene Expression Systems
Regulation Minimized leaky expression in the absence of tetracycline. High levels of leaky expression in the absence of inducer due to basal transgene expression. E.g. Tamoxifen-based system, riboswitch-based system.
Gene induction level Achieves rapid and high levels (1000-fold) of target gene induction in the presence of tetracycline. Achieves much lower levels (100-fold) of target gene induction. E.g. Tamoxifen-based system, riboswitch-based system.
Reversibility Can achieve reversible gene expression by the addition and removal of tetracycline. Results in irreversible activation of gene expression. E.g. Tamoxifen-based system.
Toxicity High level induction can be achieved with non-toxic levels of doxycycline. Exhibits increased cellular toxicity. E.g. Tamoxifen-based system.
Cost-effective Requires tetracycline or one of its derivatives such as doxycycline which are cheap and easily available. Requires inducers which are more expensive. E.g. hormone-based systems.
Pleiotropic effects Minimized pleiotropic effects due to the absence of prokaryotic regulatory sequences in mammalian cells. Increased pleiotropic effects due to activation of non-target endogenous genes. E.g. Ecdysone-based system, CID-based system.
All-in-one vs. dual vector design

GOI의 tetracycline 조절 유도 또는 억제를 달성하려면, 타겟 세포가 TRE promoter에 의해 구동되는 GOI와 Tet regulatory protein (tTA, tTS 및/또는 rtTA)을 동시에 공동 발현하는 것이 필수적이다. 이는 동일한 벡터에서 GOI 및 Tet regulatory protein을 모두 발현하거나(all-in-one vector), GOI 및 Tet regulatory protein 발현을 유도하기 위해 별도의 벡터를 사용하여(dual vector) 수행할 수 있다. All-in-one 벡터 사용의 장점은 기술적으로 간단한 단일 벡터를 사용하여 Tet 조절 유전자 발현에 필요한 모든 컴포넌트를 세포에 전달할 수 있다는 것이다. GOI 및 Tet regulatory protein을 공동 발현하기 위해 별도의 벡터를 사용하면 두개의 개별 plasmid/virus로 타겟 세포로의 co-transfection/co-transduction이 필요하며, 모든 세포가 plasmid/virus로 동시에 transfection/transduction되는 것은 아니기 때문에 기술적으로 어려울 수 있다. Dual 벡터를 사용하기 위한 대안적인 방법은 원하는 GOI를 운반하는 plasmid/virus로 Tet regulatory protein을 안정적으로 발현하는 세포 또는 개체에 transfection/transduction하는 것이다. 그러나 이 방법은 상당한 시간이 걸리고 노동 집약적일 수 있다. 이러한 어려움에도 불구하고, dual 벡터 시스템은 동일한 Tet regulatory protein을 발현하는 plasmid, virus 또는 cell line을 여러 다른 GOI 발현 plasmid/virus와 함께 사용할 수 있다는 유연성 때문에 때때로 선호되기도 한다.

Tissue-specific Tet inducible gene expression

VectorBuilder는 표준 및 low-leak의 두가지 형태의 all-in-one (Tet-On) 벡터를 제공하여 GOI의 조직 특이적 유도를 달성하도록 한다. 표준 Tet-On 벡터 시스템은 동일한 사용자-선택 조직 특이적 promoter에 의해 구동되는 tTS와 rtTA를 융합 단백질로 발현하고, low leak Tet-On 벡터 시스템은 tTS 발현을 위한 일반 promoter 및 rtTA 발현을 위한 사용자-선택 조직 특이적 promoter를 사용한다. Low leak 디자인은 tetracycline이 없을 때는 비타겟 조직에서 누출 발현을 최소화하는 이점을 제공하고, tetracycline의 존재하에 타겟 transgene의 조직 특이 유도를 허용한다.

VectorBuilder 웹사이트의 "정보 자료"> "Learning Center"에는 Tet inducible 유전자 발현 실험을 성공적으로 계획, 실행 및 문제 해결하는데 도움이 되는 풍부한 교육 자료가 있다

Click to read guides on Tet inducible vector systems
Click to read guides on Tet vector components 

FAQ

Should I use a rtTA only or a tTS/rtTA Tet-On vector system?

Unlike Tet-On systems relying only on rtTA that usually have significant leaky expression without induction, our Tet-On vector system expressing tTS/rtTA acts as a true tetracycline-regulated on-and-off switch for controlling gene expression, which can minimize background expression without induction and result in high sensitivity and high dynamic range of tetracycline induction (Figure 2). In the absence of tetracycline, the tTS protein binds to the TRE promoter leading to active suppression of gene transcription and thereby, minimizing background expression. The rtTA protein, on the other hand, binds to the TRE promoter to activate gene transcription only in the presence of tetracycline.

- Dox+ Dox

rtTA

Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image

tTS/rtTA

Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image

Figure 2. EGFP expression in 293T cells transfected with either an all-in-one (Tet-On) vector expressing EGFP and rtTA (Top) or an all-in-one (Tet-On) vector expressing EGFP and tTS/rtTA (Bottom). EGFP expression was checked both in the absence (-Dox) and presence (+Dox) of doxycycline 48 hours post-transfection.

If using lentivirus for delivering Tet system components, should I use all-in-one or dual vector design?

For delivering Tet system components using lentivirus, we generally do not recommend all-in-one vector design. Based on our internal data and many of our customers’ feedback, the gene induction efficiency using all-in-one lentivirus is context-dependent and often not satisfying. An all-in-one vector usually contains two gene expression cassettes: GOI driven by TRE promoter, and Tet regulatory protein (e.g. tTA, tTS and/or rtTA) expression cassette. For lentiviral vector, carrying multiple gene expression cassettes are sometimes problematic due to the conflict between the requirement for proper virus packaging and the requirement for independent expression of different cassettes. Internal polyadenylation signal is not allowed to be placed between the two LTRs of lentiviral vector as this would interrupt virus packaging. As a result, transcription from the upstream promoter does not stop at the end of the upstream ORF, and continues to pass through the downstream promoter(s) and ORF(s), which often leads to partial inhibition of expression of the downstream ORF(s). In an all-in-one lentiviral vector, since Tet regulatory proteins are placed downstream of the GOI, their expression can be much reduced, leading to leaky expression and inefficient induction (Figure 3).

- Dox+ Dox

All-in-one

Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image

Dual

Inducible Tet-on vector transfection image Inducible Tet-on vector transfection image

Figure 3. EGFP expression in 293T cells transduced with either all-in-one (Tet-On) lentivirus (Top) or dual (Tet-On) lentivirus (Bottom). For dual vector-based induction, 293T cells stably expressing tTS/rtTA were transduced with lentivirus expressing TRE driven EGFP. EGFP expression was checked both in the absence (-Dox) and presence (+Dox) of doxycycline 48 hours post-transduction.

Which vector system should I use?

One of the key factors underlying the design of any successful experiment is the choice of the vector system used for delivering the genes of interest into the target cells. Given that there are various viral and non-viral vector options available, several factors should be taken into consideration while selecting the ideal vector suitable for your experimental design. Some of the key considerations include: Are your target cells easy or difficult to transfect? Do you want transient expression or stable integration into the host genome? Do you need to use a customized promoter to drive your gene of interest? Will your vector be used in cell culture or in vivo? Do you need conditional or inducible gene expression? How big is your gene of interest?

The table below lists the commonly used vector systems and key considerations for selecting the right vector suitable for your experimental design.

Regular Plasmid Vectors Viral Vectors Transposon-based Vectors
Transfection-based Yes No Yes
Transient expression or stable integration Transient Stable integration Stable integration
Requires packaging No Yes No
Cargo capacity Large Small to medium Medium to large
Primary use Cell culture Cell culture & In vivo Cell culture & in vivo
Promoter customization Yes Depending on viral vector type Yes