Stable Cell Line Generation

VectorBuilder는 경제적인 가격과 신속한 소요시간으로 원하는 유전자가 변형된 stable cell line 생산 서비스를 제공할 수 있다. VectorBuilder는 실험적 요구와 특정 cell line의 특성에 따라 맞춤형 벡터를 디자인하고 제작할 수 있다. Chemical transfection, electroporation 또는 바이러스 transduction은 원하는 DNA 변화를 타겟 세포에 도입하기 위해 적절하게 사용된다. 표준 drug selection에 따라 polyclonal cell population 또는 monoclonal cell line을 계대 배양하고 검증한 후 바로 사용할 수 있게 배송된다. 모든 세포는 원하는 유전자형을 보장되며 오염 물질이 없으며 ATCC 표준에 따라 인증된다.

Types of stable cell lines offered
  • Overexpression stable cell lines
  • shRNA knockdown stable cell lines
  • Tet inducible gene expression stable cell lines
  • CRISPR stable cell lines (includes gene knockout, knockin and point mutation)

Service Details

Price and turnaround
Stable Cell Line Model Strategy Deliverable Price (USD) Turnaround
Gene Overexpression Lentivirus Based Pooled Cells From $3,199 9-15 weeks
Single Clone From $5,199 12-20 weeks
shRNA Gene Knockdown Lentivirus Based Pooled Cells From $5,699 8-13 weeks
Single Clone From $7,699 11-18 weeks
Tet Inducible Gene Expression Lentivirus-based Pooled Cells From $3,599 10-16 weeks
Single Clones From $5,899 13-21 weeks
Gene Knockout Regular Plasmid CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $5,999 10-16 weeks
Lentiviral CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $6,999 10-17 weeks
Gene Knockin Regular Plasmid CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $10,099 14-19 weeks
Point Mutation Regular Plasmid CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $9,199 13-19 weeks

Technical Information

Gene overexpression

VectorBuilder는 GOI (genes of interest)를 과발현하는 stable cell line을 제조하여 transient transfection과 같은 변동을 극복하는데 도움이 될 수 있다. 과발현 stable cell line은 lentiviral transduction에 이어 표준 drug selection에 의해 생성된다. GOI 발현 수준은 RT-qPCR에 의해 검증된다. 또한 최종 cell line 제품을 출고하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다. Western blot 및 immunocytochemistry와 같은 다른 밸리데이션 분석도 요청시 수행할 수 있다.

Gene Overexpression image
shRNA gene knockdown

VectorBuilder는 GOI의 장기 knockdown이 필요한 응용 분야를 위해 shRNA knockdown stable cell line을 제조할 수 있다. GOI의 효율적인 knockdown을 보장하기 위해, 타겟 세포는 knockdown 스코어에 따라 상위 3개의 shRNA를 운반하는 3개의 lentivirus로 각각 transduction 된다. RT-qPCR에 의해 검증된 최고의 knockdown 효율을 보여주는 cell line이 제공된다. 또한 최종 cell line 제품을 출고하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다.

shRNA gene knockdown image
Tet inducible gene expression

VectorBuilder는 최소의 백그라운드 발현과 높은 GOI induction을 갖는 Tet inducible 유전자 발현 stable cell line을 맞춤 제작할 수 있다. 또한, Tet regulatory 단백질을 발현하는 stable cell line (예 : rtTA, tTS/rtTA, Tet3G 등)를 제조 할 수 있으며, 이는 유연한 실험 디자인 및 신뢰할 수 있는 Tet inducible 유전자 발현을 위해 TRE 구동 GOI를 운반하는 plasmid/virus로 transfection/transduction될 수 있다. Tet-On stable cell line의 경우, GOI의 유도는 RT-qPCR에 의해 검증된다. 또한 최종 cell line 제품을 출고하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다.

Tet inducible gene expression image
Gene knockout

VectorBuilder는 GOI의 영구적인 knockout으로 stable cell line을 제조할 수 있다. GOI의 안정적인 stable cell line은 CRISPR 기반 방법을 사용하여 달성되며, 여기서 GOI를 타겟으로 하는 한 쌍의 gRNA는 Cas9와 함께 타겟 세포로 도입된다. 이것은 타겟 유전자에 대한 두개의 절단을 생성한다. 세포가 두 절단 부위의 잘라진 끝을 복구하려고 시도하면 일반적으로 두 부위에 걸쳐 큰 삭제가 발생한다. 2개의 절단 부위는 타겟 유전자의 기능적으로 중요한 영역의 인접하도록 디자인되어 이들을 포함하는 deletion이 유전자 기능의 손실로 이어질 가능성이 가장 높다.

세포 유형에 따라 lentivirus 또는 regular plasmid CRISPR 벡터를 사용하여 타겟 유전자 knockout을 달성할 수 있다. 최종 cell line은 knockout을 확인하기 위해 타겟 유전자좌의 Sanger 시퀀싱에 의해 평가된다. 또한 최종 cell line 제품을 출고하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다.

Gene knockout image
Gene knockin

VectorBuilder는 원하는 게놈 타겟 사이트에서 GOI의 영구적인 knockin을 통해 stable cells line을 제조할 수 있다. GOI의 안정적인 knockin은 CRISPR 기반 방법에 의해 달성되며, 여기서 타겟 사이트 특이적 gRNA가 Cas9 및 HDR 매개 유전자 knockin의 템플릿 역할을 하는 donor 벡터와 함께 세포에 도입된다.

최종 cell line은 knockin을 확인하기 위해 타겟 유전자좌의 Sanger 시퀀싱에 의해 평가된다. 또한 최종 cell line 제품을 출고하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다.

Gene knockin image
Point mutation

VectorBuilder는 관심있는 게놈 타겟 사이트에서 원하는 point mutation을 보유하는 stable cells line을 제조할 수 있다. Point mutation을 갖는 stable cells line은 CRISPR 기반 방법을 사용하여 생성되며, 여기서 타겟 사이트 특이적 gRNA가 Cas9 및 point mutation의 HDR 매개 insertion에 대한 템플릿 역할을 하는 단일 가닥 donor oligonucleotide (ssODN)와 함께 세포에 도입된다.

최종 cell line은 point mutation 존재를 확인하기 위해 타겟 유전자좌의 Sanger 시퀀싱에 의해 평가된다. 또한 최종 cell line 제품을 출고하기 위해 멸균 테스트 및 mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행된다.

Point mutation image

How to Order

FAQ

Can VectorBuilder QC final cell lines by assays such as Western blot, immunocytochemistry and Southern
blot?

Stable cell lines generated by VectorBuilder undergo stringent QC procedures which typically include standard assays such as sterility tests and mycoplasma detection along with appropriate assays to validate the genotype of the final cell lines depending on the type of stable cell line. For gene overexpression, shRNA gene knockdown and Tet inducible stable cell lines RT-qPCR is performed for validating ectopic GOI expression, loss of GOI expression and induction of GOI expression in the final cell line, respectively. Whereas for CRISPR stable cell lines (gene knockout, knockin and point mutation), Sanger sequencing of the targeted region is performed to validate the presence of the desired genomic edit in the final cell line.

In addition to the standard QC assays mentioned above, VectorBuilder can perform Western blot, immunocytochemistry and Southern blot analyses on generated stable cell lines upon request. These assays are available as add-on services and can be offered after evaluating the feasibility of requested assays for the corresponding stable cell lines. However, VectorBuilder does not necessarily guarantee the results of the add-on validation assays, because some assays heavily rely on the availability of validated antibodies and suitable testing system (e.g. cell line, etc.).

How does VectorBuilder define turnaround time for stable cell lines?

For stable cell line generation services, VectorBuilder defines estimated turnaround as the time from production initiation to completion. Production completion is achieved once the final cell line passes QC and is ready to be shipped out. Turnaround time does not include waiting time for any customer-supplied materials (e.g. cell lines or template DNA for vector construction), QC of such materials, and transit time for shipping final deliverables to the customer.