세포주 (Stable Cell Line) 제작

VectorBuilder는 경쟁력 있는 가격과 짧은 소요시간에 원하는 유전자가 변형된 안정한 세포주 (stable cell line) 제작 서비스를 제공할 수 있습니다. VectorBuilder는 고객의 실험적인 요구와 특정한 세포주의 특성에 따라 맞춤형 벡터를 디자인하고 제작할 수 있습니다. 원하는 DNA상의 변화를 타겟 세포에 도입하기 위해 화학적 transfection, electroporation 또는 바이러스 transduction 방법들이 적절하게 사용됩니다. 항생제에 의한 선별 후에, polyclonal cell population 또는 monoclonal cell line으로 계대 배양하고 검증한 후에 바로 사용할 수 있도록 배송됩니다. 모든 세포는 원하는 유전자형을 가진 세포들로 보장되고 오염 물질이 없으며, ATCC 표준에 따라 인증됩니다.

제공되는 안정적인 세포주들의 유형
  • 원하는 유전자의 과발현을 위한 안정한 세포주
  • shRNA의 의하여 원하는 유전자를 knockdown하는 안정한 세포주
  • Tet에 의하여 유도되는 유전자 발현을 위한 안정한 세포주
  • CRISPR를 이용하여 원하는 유전자를 knockout, knockin하거나 변이를 돌입한 안정한 세포주

서비스 세부 사항

가격 및 소요 시간
Stable Cell Line Model Strategy Deliverable Price (USD) Turnaround
Gene Overexpression Lentivirus Based Pooled Cells From $3,199 9-15 weeks
Single Clone From $5,199 12-20 weeks
shRNA Gene Knockdown Lentivirus Based Pooled Cells From $5,699 8-13 weeks
Single Clone From $7,699 11-18 weeks
Tet Inducible Gene Expression Lentivirus-based Pooled Cells From $3,599 10-16 weeks
Single Clones From $5,899 13-21 weeks
Gene Knockout Regular Plasmid CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $5,999 10-16 weeks
Lentiviral CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $6,999 10-17 weeks
Gene Knockin Regular Plasmid CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $10,099 14-19 weeks
Point Mutation Regular Plasmid CRISPR/Cas9 Based Single Clone From $9,199 13-19 weeks

기술적인 정보

유전자 과발현 (Gene Overexpression)

VectorBuilder는 단기간 transfection에 의한 변동을 극복하는데 도움이 될 수 있는 GOI (gene of interest)를 과발현하는 안정한 세포주를 제조할 수 있습니다. 과발현 안정 세포주는 렌티바이러스 transduction에 이어 표준적인 항생제 선별에 의해 생성됩니다. GOI 발현 수준은 RT-qPCR에 의해 검증됩니다. 또한 최종 세포주를 출고하기 위해 무균시험 및 Mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행됩니다. 요청에 따라 western blot 및 immunocytochemistry에 의한 분석도 가능합니다.

Gene Overexpression image
shRNA에 의한 유전자 knockdown

VectorBuilder는 GOI의 장기적인 knockdown이 필요한 응용 분야를 위해 shRNA에 의해 원하는 유전자가 knockdown되는 안정한 세포주를 제조할 수 있습니다. GOI의 효율적인 knockdown을 보장하기 위해, 타겟 세포는 knockdown 스코어에 따라 상위 3개의 shRNA 서열을 가진 3개의 렌티바이러스로 각각 transduction 됩니다. RT-qPCR에 의해 검증된 최고의 knockdown 효율을 보여주는 세포주가 고객에게 제공됩니다. 또한 최종 세포주를 출고하기 위해 무균시험 및 Mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행됩니다.

shRNA gene knockdown image
Tet에 의해 유도되는 유전자 발현

VectorBuilder는 GOI의 백그라운드 발현을 최소화하고 Tet에 의해 높은 수준의 발현 유도가 가능한 안정한 세포주를 맞춤 제작할 수 있습니다. 또한, rtTA, tTS/rtTA, Tet3G와 같은 Tet 조절 단백질을 발현하는 안정한 세포주를 제작할 수 있습니다. TRE promoter에 의하여 GOI를 발현하도록 디자인된 벡터를 plasmid나 바이러스로 이들 세포주에 transfection 또는 transduction함으로써 Tet에 의해 유도되는 유전자 발현을 할 수 있으며, 이는 실험 설계에 있어서 유연성을 제공하며 신뢰할 수 있는 Tet 유도에 의한 유전자 발현을 가능하게 합니다. Tet-On 세포주의 경우, GOI의 유도 발현은 RT-qPCR에 의해 검증됩니다. 또한 최종 세포주를 출고하기 위해 무균시험 및 Mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행됩니다.

Tet inducible gene expression image
유전자 knockout

VectorBuilder는 GOI가 영구적으로 knockout된 안정한 세포주를 제조할 수 있습니다. GOI가 안정적으로 knockout된 안정한 세포주는 CRISPR 기반의 방법을 이용하며, GOI를 타겟으로 하는 한 쌍의 gRNA를 Cas9와 함께 타겟 세포로 도입합니다. 이는 타겟 유전자에 두개의 절단 부위를 생성합니다. 세포가 두 절단 부위의 잘라진 끝부분을 복구하는 과정에서 두 절단 부위를 포함하는 큰 서열 삭제가 발생합니다. 두 절단 부위는 서열 삭제가 일어날 때 유전자의 기능이 상실될 수 있는 중요한 영역의 양쪽에 있는 서열들로 디자인됩니다.

세포 유형에 따라 렌티바이러스 또는 일반 plasmid 기반의 CRISPR 벡터를 사용하여 타겟 유전자 knockout을 할 수 있습니다. 최종 세포주는 knockout을 확인하기 위해 타겟 유전자의 서열을 Sanger sequencing에 의해 확인합니다. 또한 최종 세포주를 출고하기 위해 무균시험 및 Mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행됩니다.

Gene knockout image
유전자 knockin

VectorBuilder는 유전체의 원하는 타겟 부위에 GOI가 영구적으로 knockin된 안정한 세포주를 제조할 수 있습니다. GOI의 안정적인 knockin은 CRISPR 기반의 방법에 의하며, 타겟 부위에 특이적인 gRNA가 Cas9과 HDR에 의한 유전자 knockin의 template 역할을 하는 donor 벡터와 함께 세포에 도입됩니다.

최종 세포주는 knockin을 확인하기 위해 타겟 유전자의 서열을 Sanger sequencing에 의해 확인합니다. 또한 최종 세포주를 출고하기 위해 무균시험 및 Mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행됩니다.

Gene knockin image
점 변이 (point mutation) 도입

VectorBuilder는 유전체의 관심부위에 원하는 점 변이들을 보유하는 안정한 세포주들을 제조할 수 있습니다. 점 변이을 갖는 안정한 세포주는 CRISPR 기반의 방법에 의하며, 타겟 부위에 특이적인 gRNA가 Cas9과 HDR에 의한 점 변이 도입을 위한 template 역할을 하는 single-stranded donor oligonucleotide (ssODN)와 함께 세포에 도입됩니다.

최종 세포주는 도입된 점 변이들을 확인하기 위해 타겟 부위의 서열을 Sanger sequencing에 의해 확인합니다. 또한 최종 세포주를 출고하기 위해 무균시험 및 Mycoplasma 검출과 같은 일련의 표준 QC 분석이 수행됩니다.

Point mutation image

주문 방법

자주 묻는 질문들

VectorBuilder에서 최종 세포주들에 대한 western blot, immunocytochemistry, southern blot 등의 QC를 위한 분석을 할 수 있습니까?

VectorBuilder에서 제조되는 안정한 세포주들은 세포 유형에 따라 최종 세포주의 유전자형을 확인하기 위한 분석들 이외에도 무균시험과 Mycoplasma 검출 등의 표쥰적인 분석 방법을 포함하는 엄격한 QC 과정들을 거치게 됩니다. 유전자 과발현, shRNA에 의한 유전자 knockdown, Tet에 의해 유도되는 발현을 위한 세포주들은 RT-qPCR에 의하여 각각 GOI의 이소성 (ectopic) 발현, 발현 상실, 유도 발현을 분석합니다. 반면에 유전자 knockout, knockin, 및 점 변이 등 CRISPR를 사용하여 제조된 안정한 세포주들은 Sanger sequencing에 의하여 최종 세포주의 유전체 내의 원하는 부위에 편집이 되었는지를 확인합니다.

VectorBuilder는 위에서 언급된 표준적인 QC 이외에도 요청 시에 최종 세포주로 western blot, immunocytochemistry, southern blot 등의 분석을 해드릴 수 있습니다. 최종 세포주에 대하여 고객이 요청하는 서비스의 가능 여부를 검토한 후에 부가 서비스로 할 수 있지만, 몇몇 추가 분석법들은 검증된 항체와 적절한 테스트 세포주와 같은 테스트시스템의 유무에 의하여 매우 큰 영향을 받을 수 있기 때문에 결과에 대해서는 저희가 보장해드릴 수 없습니다.

VectorBuilder에서는 안정한 세포주를 만드는 소요 시간을 어떻게 정의하고 있습니까?

VectorBuilder에서 안정한 세포주 제작을 위한 소요 시간은 시작부터 제작 완료되는 시점까지입니다. 제작 완료는 최종 세포주가 QC를 통과하여 고객에게 발송될 준비가 된 때를 의미합니다. 고객이 제공하는 세포주나 벡터 제작을 위한 template DNA 가 당사에 배송되기를 기다리는 시간 및 배송된 후에 당사에 의하여 QC하는 시간, 최종결과물을 고객에게 배송하는데 걸리는 시간 등은 소요 시간에 포함되지 않습니다.