Off-the-Shelf IVT mRNA

VectorBuilder는 in vitro 및 in vivo에서 높은 수준의 발현에 대해 완전히 검증된 바로 구매 가능한 mRNA를 제공하며, mRNA 기반 유전자 전달의 효율성을 평가하거나 mRNA 실험을 위한 대조군으로 사용할 수 있습니다. 고객 맞춤형 mRNA 생산은 VectorBuilder의 mRNA 유전자 전달 솔루션 을 참조하시기 바랍니다.

중점 사항
  • Cap 1, 검증된 5' & 3' UTR, N1-Methylpseudouridine (m1Ψ)과 같은 modified nucleotide가 포함된 mRNA
  • 강력한 발현을 달성하기 위해 서열을 최적화한 HiExpressTM Firefly 및 Guassia Luciferase mRNA
  • 서열 검증, integrity, purity 및 발현 검증을 포함한 포괄적인 품질 관리

제품정보

배송 및 보관

mRNA 제품은 1 mM sodium citrate buffer (pH 6.4)에 저장하여 드라이아이스로 배송됩니다. mRNA는 -80°C 에서 최대 12개월 동안 보관할 수 있습니다. 반복적인 동결-해동은 피하십시오.

기술적인 정보

mRNA 생산 프로세스 및 QC

Figure 1. in vitro transcription에 의한 RNA 합성의 일반적인 워크 플로우.

VectorBuilder의 mRNA 생산 워크플로우는 선호하는 코돈, GC 함량 및 RNA 2차 구조의 열역학적 안정성을 고려하여 템플릿 DNA 서열의 디자인 및 합성한 후in vitro transcription 벡터에 클로닝합니다. 그런 다음 plasmid DNA를 정제, 검증 및 선형화한 후 in vitro transcription 반응을 거쳐 원하는 transcript를 생성합니다. 변형된 뉴클레오티드는 in vitro transcription중에 포함되어 in vivo translation을 개선하고 면역원성을 감소시킵니다. Co-transcriptional 또는효소 방식을 사용하여 고효율 캡핑(>95%)을 달성할 수 있습니다. 그런 다음 mRNA는 mRNA-capture beads에 의해 정제된 다음 추가 QC를 진행합니다.

문서 자료
물질안전보건자료 (MSDS) 시험 성적서 (COA) 사용 설명서 브로셔

자주 묻는 질문

mRNA cap과 capping 방법의 차이점은 무엇입니까?

Cap 0는 5’ to 5’ triphosphate linkage를 통해 진핵생물 mRNA의 5' 말단에 추가되는 N7-methylguanosine (m7G)을 나타냅니다. 이 변형은 co-transcription으로 발생하는 일련의 효소 반응을 통해 추가되고, nuclear export, 전사체 안정성을 조절하는 기능을 하고, eukaryotic translation initiation factor (eIF4E)에 의한 인식을 통해 mRNA의 translation을 촉진하는 기능을 합니다. Cap 1은 m7G cap 외에 전사된 mRNA 서열의 첫번째 뉴클레오타이드 (m7GpppNm)의 2'O에 메틸기가 추가된 것 입니다. 포유류 세포에서 cap 1 구조는 mRNA가 선천성 면역에 의해 표적화되지 않고 자가로 인식되는 중요한 마커이다. 합성된 mRNA에 cap 1 구조를 추가하면 in vivo에서 mRNA 발현이 향상되고 면역원성이 감소하는 것으로 입증되었습니다.

In vitro transcription된 RNA에 대한 capping은 cap analogs와 함께 co-transcription되거나 또는 효소 반응을 통해 transcription 후에 발생할 수 있습니다. Capping 방법의 효율성은 LC-MS를 사용하여 검증하고 있습니다.

mRNA에 변형된 뉴클레오타이드를 결합하는 것을 고려해야 하는 이유는 무엇이며, 어떤 것을 포함할 수 있습니까?

세포는 외부 RNA를 인식하면 면역 반응을 활성화하는 cytosolic 및 endosomal RNA receptors를 갖고 있습니다. 변형된 뉴클레오타이드는 일반적으로 endogenous cellular RNA에서 발견됩니다. mRNA에 특정 변형 뉴클레오티드를 포함하면 면역원성이 감소하고 2차 구조가 변경되며 서열 의존적 방식으로 translation 효율과 반감기가 증가합니다.VectorBuilder는 일반적으로 사용되는 N1-Methylpseudouridine(m1Ψ) 을 제공합니다. N1-Methylpsuedouridine tRNA에서 처음 확인된 자연 발생 뉴클레오타이드이지만, mRNA를 코딩하는데 사용하는 것을 최근에야 알게 되었습니다. Uridine의 이러한 메틸화된 유도체는 전통적인 Watson-Crick base pairing을 변경하지 않고 mRNA IVT 및 translation에서 표준 뉴클레오타이드를 대체할 수 있습니다. mRNA 치료제에 사용하는 주요 장점은 RNA immune receptors에 의한 인식을 변경하여 원치 않는 면역 효과를 완화하고 전사체 안정성 및 translation을 향상시키는 능력입니다.