MuteFree™ AAV Backbone

VectorBuilder의 새로운 MuteFree™ AAV 백본은 매우 안정적인 ITR (inverted terminal repeats)을 가진 AAV transfer vector의 생성을 가능하게 설계, 최적화 및 검증되었으며, 벡터 내 돌연변이 발생을 방지하는 업계 최고의 방법을 제공합니다. 이를 통해 유전자 치료제의 안정성 (stability)을 극대화하여 일관되고 높은 수율의 생산이 가능합니다.

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ITR 안정성 (Stability) 이슈

ITR은 AAV 패키징 및 도입 유전자 발현에 중요한 역할을 합니다. 그러나 이러한 GC 함량이 높은 영역은 매우 불안정하고 돌연변이가 발생하기 쉬워, 이질성 (heterogeneity) 증가, 바이러스 역가 감소, 도입 유전자 발현 저하를 초래할 수 있습니다. 임상 개발 과정에서 이는 제조를 복잡하게 만들 수 있으며, 원하는 치료 효과를 얻기 위해 더 높은 투여량이 필요할 수 있습니다. 특화된 E. coli 균주, 배양 조건 변경, 변형된 ITR 서열을 포함하여 이러한 문제를 완화하기 위한 전략들이 개발되었지만, 그것들이 항상 효과적인 것은 아니며 plasmid 및 AAV 수율을 저하시킬 수 있습니다.

AAV ITR은 매우 불안정
Figure 1. 초기 제한효소 처리 QC 검증을 통과한 연구 및 산업 파트너로부터 수집된 300개 이상의 벡터의 ITR에 대해서 Sanger 시퀀싱을 수행했습니다. 시퀀싱 결과, AAV transfer vector ITR의 약 40%에서 이전에 발견되지 않았던 돌연변이가 확인되었습니다 (Nucleic Acids Res. 2025. doi: 10.1093/nar/gkaf697).

ITR 안정성을 향상시키기 위한 혁신적인 솔루션

VectorBuilder는 ITR 안정성을 보호하는 새로운 AAV transfer vector인 MuteFree™ AAV를 개발했습니다. 최적화된 벡터 백본은 바이러스 벡터에 ITR 변이가 없도록 보장하여, 유전자 치료제의 정체성 (identity), 효능 (efficacy) 및 안전성 (safety)에 대한 신뢰를 증가시킵니다. VectorBuilder의 혁신가 팀이 세심하게 개선하고 검증한 MuteFree™는 유전자 치료제 제품이 요구하는 일관성을 제공합니다.

IP outlicensing Proprietary Delivery Systems
MuteFree™ AAV는 ITR 안정성을 대폭 향상
Figure 2. MuteFree™ AAV로 전환하면 E. coli에서 10회 연속 계대 배양 (>160 population doublings) 후 ITR 돌연변이율이 single-stranded AAV(ssAAV)의 경우 48.1%에서 0%로, self-complementary AAV (scAAV)의 경우 31.8%에서 0%로 감소합니다. ITR 무결성 (integrity )은 Sanger 시퀀싱으로 분석했습니다.

기존 파이프라인에 완벽하게 통합

IP outlicensing Proprietary Delivery Systems

VectorBuilder의 최적화된 MuteFree™ AAV 백본은 기존 제조 워크플로우에 쉽게 통합되어 세포 및 유전자 치료제를 위한 고역가, 고품질 AAV 벡터를 일관되게 생산할 수 있도록 지원합니다.

MuteFree™를 사용한 패키징은 고역가, 고품질 및 고효능 AAV 생산을 유지
Figure 3. 기존 transfer vector 백본과 비교하여 MuteFree™ AAV를 채택한 결과, (A) 바이러스 역가 및 full capsid 비율, (B) silver-stained SDS-PAGE에 의해 보여지는 순도, (C) AAV-EGFP를 HEK293 세포에 transduction한 후 48시간 후에 측정한 transduction 효율이 유지되었습니다.