PiggyBac 시스템을 in vitro 및 in vivo에서 사용하는 방법은?

당사의 piggyBac 시스템은 두 개의 벡터를 포함하고, 둘 다 E. coli plasmids 로 제작되었다. "Helper plasmid"라고 불리는 벡터는 transposase를 인코딩한다. "Transposon plasmid "라고 불리는 다른 벡터는 교환될 영역을 묶어두는 두개의 ITRs (inverted terminal repeats)을 포함한다. 호스트 세포로 전달될 유전자(또는 다른 DNA 절편)는 ITRs 사이의 영역으로 클로닝된다.

Helper plasmid와 transposon plasmid가 타겟 세포에 co-transfect되면, helper로부터 생성된 transposase는 transposon의 두개의 ITRs을 인식하여, 측면 부위(두개의 ITRs 포함)를 호스트 게놈에 삽입한다. 삽입은 일반적으로 TTAA 서열을 포함하는 호스트 염색체 사이트에서 발생하며, 이는 삽입된 절편의 두 측면에서 복제된다.

세포 배양 시스템에서, piggyBac 벡터 시스템을 사용하는 것은 비교적 간단하며, transposon과 helper plasmids를 순차적으로 transfection하거나 co-transfection한다. 또는 transfection 대신에 electroporation을 사용할 수 있다.

그러나 살아있는 동물에서 plasmid delivery는 transfection과 electroporation의 낮은 효율로 두 plasmid의 co-delivery가 비효율적이기 때문에 더 문제가 있다. 일부 연구자들은 transposon이나 transposase를 발현하는 transgenic animal lines을 이용했다. 이 두 transgenic line을 교배하거나 하나의 plasmid를 이러한 transgenic lines에 transfection하면 살아있는 동물에서 transposon의 전위를 유도할 수 있다 (e.g. Ding et al. Cell. 122:473-83 and Horn et el. Genetics. 163:647-61)

Read more about our piggyBac gene expression vectors

나의 벡터 디자인하기 디자인 서포트 의뢰하기