gRNA specificity 스코어는 어떻게 산정하나요?

VectorBuilder는 CRISPR library design(CLD)에 사용된 알고리즘을 따라 gRNA의 특이성 스코어를 계산합니다. 간단히, 어떤 종에서 N(20)NGG 서열을 타겟으로 하는 특정 gRNA에 대해, 그 종의 게놈에서 타겟 서열과 3이하의 mismatches를 갖는 모든 잠재적 off-target 사이트를 검색한다. 이렇게 확인된 각 잠재적 off-target 사이트에 대해 단일 off-target 스코어가 계산된다. 그런 다음 모든 off-target 사이트에 대한 스코어를 집계하여 gRNA의 최종 specificity 스코어(0~100)를 계산한다. 스코어가 높을수록 더 높은 타겟팅 specificity를 나타낸다.

Specificity 스코어는 대략적인 가이드에 불과하다는 점에 유의하십시오. 실제 타겟팅 효율성과 specificity은 스코어가 예측하는 것과 다를 수 있다. 낮은 스코어의 gRNA가 잘 작용할 수도 있다.

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