MSCV Retrovirus Packaging

재조합 murine stem cell virus (MSCV) 벡터는 embryonic stem (ES) cells, embryonal carcinoma (EC) cells 및 hematopoietic stem (HS) cell에 목적 유전자의 강력한 발현을 달성하기 위한 효율적인 바이러스 벡터로, 여러 다른 포유류 세포에도 적용 가능한다. 이 retrovirus 벡터 시스템에서 MSCV retrovirus 벡터에 murine stem cell PCMV virus로부터 유래한 전략적으로 디자인된 5'LTR의 존재는 pluripotent cell line에서 타겟 유전자의 전사 활성에 기여한다. 이는 일반적으로 MMLV retrovirus 벡터에서 관찰되는 ES 및 EC 세포에서 타겟 유전자의 제한된 발현을 극복하는 데 도움이 된다.

VectorBuilder는 벡터 클로닝 서비스에 사용되는 MSCV 벡터 시스템을 위해 titer, 순도, 생존성 및 일관성 측면에서 MSCV 재조합 생산 프로토콜을 크게 개선한 독점적 기술과 시약을 개발했다. 그 결과 MSCV 벡터 클로닝과 MSCV 패키징에 대한 니즈에 만족하여 당사에 반복적으로 의뢰하는 고객들이 많아지고 있다.

Types of MSCV retrovirus offered
  • VSV-G pseudotyped MSCV retrovirus

Service Details

Price and turnaround
Scale Application Titer Volume Price (USD) Turnaround
Pilot Cell culture >107 TU/ml 250 ul (10x25 ul) $399 8-16 days
Medium 1 ml (10x100 ul) $599
Large >108 TU/ml 1 ml (10x100 ul) $999
Ultra-purified large Cell culture & in vivo >108 TU/ml 1 ml (10x100 ul) $1,599

TU = Transduction units (aka infectious units)

Deliverables
For non-ultra-purified scales For ultra-purified scales
Your custom MSCV retrovirus Your custom MSCV retrovirus

Free: control virus

  • Pilot: >107 TU/ml, 100 ul
  • Medium: >107 TU/ml, 2x100 ul
  • Large: >107 TU/ml, 2x100 ul

  Add-on purchase (optional): ultra-purified control virus

  • Ultra-purified large: >108 TU/ml, 10x100 ul, at $540
Free: Polybrene (5 mg/ml, 200 ul) Free: Polybrene (5 mg/ml, 200 ul)
Control virus

Control retrovirus 벡터는 custom 바이러스의 생물학적 응용과 일치하도록 디자인되어, retrovirus transduction을 테스트하는데 사용된다. 예를 들어 custom 바이러스가 유전자를 과발현하는 경우, 제공되는 control virus는 EGFP control retrovirus (MSCV retrovirus overexpressing EGFP)이다. Control virus에 대한 자세한 정보는 다음과 같다.

Vector System Control Virus Vector Name Control Virus Vector ID
MSCV gene expression system pMSCV[Exp]-EGFP:T2A:Puro VB010000-9311qyq
Shipping and storage

MSCV retrovirus는 HBSS buffer에 저장되며, 드라이아이스로 배송된다. 수령 즉시, 장기보관을 위해서는 -80℃ (6개월 이상 안정 가능) 또는 1주일 이내에 사용할 경우는 -20℃에서 보관하여야 한다. MSCV retrovirus의 유통기한은 약 1년이다. MSCV retrovirus의 반복적인 동결-융해 사이클은 피하세요. 이는 상당한 titer 감소를 초래할 수 있기 때문이다.

Technical Information

MSCV retrovirus production and QC

MSCV retrovirus 제조를 위해, 목적 유전자(GOI)를 운반하는 transfer 벡터는 당사의 독점적인 VSV-G를 인코딩하는 envelope 벡터와 Gag 및 Pol을 인코딩하는 packaging 벡터와 함께 packaging cell에 co-transfection 된다. 단기간 배양 후 상청액 채취하고 원심분리하여 세포이물질을 제거한 후 여과한다. 바이러스 입자는 이후 PEG로 농축된다. Ultra-purified MSCV retrovirus (in vivo grade)의 경우, 바이러스 입자는 sucrose cushion centrifugation으로 더욱 정제하고 농축한다. 당사는 qPCR 기반 방식을 사용하여 MSCV 의 기능적 titer를 측정한다.

MSCV-img

VectorBuilder에서 생산되는 각 재조합 MSCV에 대한 품질관리에는 titer 측정, 박테리아 및 fungi에 대한 무균 테스트, mycoplasma 검출 등이 있다. Transfer vector가 형광 단백질을 인코딩하는 경우, 바이러스로 transduction하고 해당 형광을 검출한다. 또한, ultra-purified MSCV의 경우, 일상적으로 endotoxin 수치를 체크하기 위해서 endotoxin 분석을 수행한다.

Technical documents
Certificate of Analysis (COA)

How to Order

Order both vector construction and virus packaging
Order virus packaging or your own vector

If customer-supplied MSCV retroviral plasmids are used in packaging, please send them to us following the Materials Submission Guidelines. Please strictly follow our guidelines to set up shipment to avoid any delay or damage of the materials. All customer-supplied materials undergo mandatory QC by VectorBuilder which may incur $100 surcharge for each item. Please note that production may not be initiated until customer-supplied materials pass QC.

FAQ

What features does MSCV retrovirus have comparing to other viral vectors?
Lentivirus MSCV Adenovirus AAV
Tropism Broad Broad; commonly used to infect ES, EC and HS cells Ineffective for some cells Depending on viral serotype
Can infect non-dividing cells? Yes No Yes Yes
Stable integration or transient Stable integration Stable integration Transient, episomal Transient, episomal
Maximum titer High Moderate Very High High
Promoter customization Yes No Yes Yes
Primary use Cell culture and in vivo Cell culture and in vivo In vivo In vivo
Immune response in vivo Low Low High Very low
What is VectorBuilder's guarantee for virus titer and turnaround?

Our titer guarantee only applies to vectors for which the region being packaged into virus (from 5’ LTR to 3’ LTR) is below MSCV cargo limit (8 kb). For sizes over this range, it may still be possible to package the vector into virus, but the titer may be reduced. Additionally, we are not able to guarantee titer for the following vectors:

  • Vectors containing sequences that could adversely affect the packaging process such as toxic genes (e.g. proapoptotic genes), genes that compromise the integrity of packaging cells or virus (e.g. membrane proteins that cause cell aggregation), and sequences prone to rearrangements or secondary structures;
  • customer-supplied plasmids containing undisclosed sequences or atypical MSCV functional elements (e.g. LTR) that may introduce uncertainties to packaging efficiency.

The estimated turnaround time is the time from production initiation to completion. It does not include waiting time for any customer-supplied materials (e.g. template DNA or viral vectors), QC of such materials, and transit time for shipping final deliverables to the customer.