In Vitro Transcription 서비스
VectorBuilder는 최대 10kb의 길이를 갖는 커스텀 RNA에 대한 in vitro transcription 기반 RNA 합성 서비스를 제공하며, 이는 non-coding RNAs (miRNA, siRNA, lncRNA, etc.), in situ hybridization, in vitro translation, RNA-단백질 상호작용 연구 및 reverse-transcription 반응에서 사용될 수 있습니다.
RNA 합성 프로세스는 당사의 벡터 클로닝 서비스에 사용되는 자체적인 in vitro transcription 벡터를 사용하여 고품질 RNA를 생산하도록 고도로 최적화되어 있습니다. 또한 고객이 제공한 벡터로도 RNA를 합성할 수도 있습니다. mRNA 외에도 CRISPR/Cas9 타겟팅을 위한 gRNA, siRNA, miRNA, lncRNA 등을 포함하여 짧은 RNA가 필요한 응용 분야를 위해 small RNA를 생성할 수 있습니다. 효율적인 IVT mRNA 개발을 위해 mRNA 디자인, 종합적인 품질 관리 및 CRO 검증을 포함한 원스톱 mRNA 유전자 전달 솔루션을 제공합니다.
제공되는 RNA의 유형
- 최대 10 kb 길이의 RNA
- CRISPR 적용을 위한 gRNA
- lncRNA, microRNA, siRNA 등과 같이 특정한 서열을 가진 non-coding RNA
기술적인 정보
RNA 생산 프로세스 및 QC
RNA 생산을 위해 적절한 반응 조건과 nucleotide triphosphates의 존재 하에 bacteriophage T7 RNA polymerase (RNAP)에 의한 RNA의 고효율 생산을 촉진하기 위해 원하는 DNA template 서열의 업스트림에 있는 T7 promoter를 사용하는 in vitro transcription 방법을 사용합니다. T7 RNAP는 매우 강력한 효소로 이 효소를 사용한 transcription 반응은 몇 시간 내에 많은 양의 활성을 지닌 RNA를 생산할 수 있습니다. VectorBuilder의 일반적인 mRNA 생산 워크플로우는 template DNA 서열을 디자인하고 합성한 후, in vitro transcription 벡터에 클로닝합니다. 이후에 plasmid DNA는 정제, 검증, 선형화 단계를 거쳐, in vitro transcription 반응에 사용되어 원하는 transcript가 생성됩니다. 그런 다음 RNA는 기본 정제 과정인 silica gel 을 사용하여 정제됩니다. 별도 요청 시 magnetic-bead를 사용하여 mRNA를 정제할 수도 있습니다.
Figure 1. In vitro transcription에 의하여 RNA를 합성하는 일반적인 워크플로우.
VectorBuilder에서 생산된 모든 RNA는 오염 물질이 없고 디자인한 대로 정확한 서열을 포함하는지를 확인하기 위한 엄격한 품질 관리를 거칩니다. 여기에는 1) 제한효소 절단 분석 및 Sanger sequencing에 의한 클로닝된 DNA template 서열을 포함하는 in vitro transcription 벡터의 검증; 2) transcript 사이즈에 따라 denaturing PAGE 또는 agarose gel electrophoresis에 의하여 합성된 RNA 최종 QC가 포함됩니다.
