CRISPR Cell Lines
VectorBuilder는 Cas9 또는 변이체를 발현하는 다양한 단일 클론 유래의 기능적으로 검증된 세포주를 제공합니다. 이러한 CRISPR 세포주는 knockout, knockin, activation 및 inhibition는 물론, high-throughput CRISPR 스크리닝을 위한 유연하고 강력한 도구로서, 실험에서 신뢰할 수 있는 결과를 보장합니다.
주문 정보 Price Match
배송 및 보관
세포는 드라이아이스 (in 10% DMSO-containing culture medium)에 담겨 배송됩니다. 수령 즉시 장기 보관을 위해 cryovial을 액체질소 증기상 (Vapor Phase)에 옮겨 보관하십시오. 단기 보관 (1주일 이내)을 위해 -80°C에서 보관할 수도 있습니다.
기술 정보
Figure 1. VectorBuilder의 hCas9-expressing stable cell line을 사용한 워크플로우.
VectorBuilder는 다양한 응용분야에 적합한 CRISPR 세포주를 제공합니다. hCas9을 안정적으로 발현하는 세포주에 하나 이상의 gRNA와 필요한 경우 repair donor DNA 주형 (ssODN, circular or linear dsDNA)을 도입하여 표적 유전자의 knockout또는 knockin을 달성할 수 있습니다. dCas9-SAM 또는 dCas9-KRAB-MeCP2를 안정적으로 발현하는 세포주에 msgRNA 또는 gRNA를 도입하여 표적 유전자 전사 활성화 또는 억제를 달성할 수 있으며, 이를 통해 유전체를 영구적으로 변형하지 않고 표적 유전자 발현을 조절할 수 있습니다. 또한, VectorBuilder의 premade CRISPR 세포주는 호환되는 guide RNA library를 도입하면 high-throughput 스크리닝에 적합합니다.
자세한 내용은 CRISPR 게놈 편집 솔루션 및 CRISPR 시스템 사용 설명서를 참조하십시오. Premade CRISPR 세포주에 사용할 guide RNA 발현 컨스트럭트 또는 donor 벡터를 디자인하려면 Vector Design Studio에서 직접 벡터 디자인하거나 디자인 서포트 의뢰하기로 문의해 주십시오.
실험에 의한 검증
Figure 2. hCas9-expressing K562 세포의 검증. hB2M 유전자를 표적으로 하는 single gRNA를 발현하는 plasmid로 세포를 transfection 시켰습니다. Transfection 72시간 후, 게놈 DNA를 추출하고, 표적 영역을 증폭하여 Sanger 시퀀싱을 수행했습니다. 그런 다음, Indel decomposition 분석을 수행하여 편집 효율 을 평가했습니다 (43.2% of sequence with mutation inferred by trace decomposition).
정보 자료
FAQ
Premade stable cell line은 mixed pools또는 single clone에서 유래한 것인가요?
VectorBuilder의 모든 Premade stable cell line은 일관성과 재현성을 보장하기 위해 단일 클론에서 유래합니다. VectorBuilder의 단일 클론 안정 세포주는 엄격한 품질관리 및 기능 검증을 거쳐 다운스트림 연구에 대한 확신을 제공합니다.
주요 인용 논문
A lysine-rich cluster in the N-BAR domain of ARF GTPase-activating protein ASAP1 is necessary for binding and bundling actin filaments
Anjelika Gasilina, et al.
J Biol Chem, 2022, doi: 10.1016/j.jbc.2022.101700
Products used:
Abstract: Actin filament maintenance is critical for both normal cell homeostasis and events associated with malignant transformation. The ADP-ribosylation factor GTPase-activating protein ASAP1 regulates the dynamics of filamentous actin-based structures, including stress fibers, focal adhesions, and circular dorsal ruffles. Here, we have examined the molecular basis for ASAP1 association with actin. Using a combination of structural modeling, mutagenesis, and in vitro and cell-based assays, we identify a putative-binding interface between the N-Bin-Amphiphysin-Rvs (BAR) domain of ASAP1 and actin filaments. We found that neutralization of charges and charge reversal at positions 75, 76, and 79 of ASAP1 reduced the binding of ASAP1 BAR-pleckstrin homology tandem to actin filaments and abrogated actin bundle formation in vitro. In addition, overexpression of actin-binding defective ASAP1 BAR-pleckstrin homology [K75, K76, K79] mutants prevented cellular actin remodeling in U2OS cells. Exogenous expression of [K75E, K76E, K79E] mutant of full-length ASAP1 did not rescue the reduction of cellular actin fibers consequent to knockdown of endogenous ASAP1. Taken together, our results support the hypothesis that the lysine-rich cluster in the N-BAR domain of ASAP1 is important for regulating actin filament organization.
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The KU-PARP14 axis differentially regulates DNA resection at stalled replication forks by MRE11 and EXO1
Ashna Dhoonmoon, Claudia M. Nicolae & George-Lucian Moldovan.
Nature Communications, 2022, doi: 10.1038/s41467-022-32756-5
Products used:
Abstract: Suppression of nascent DNA degradation has emerged as an essential role of the BRCA pathway in genome protection.In BRCA-deficient cells, the MRE11 nuclease is responsible for both resection of reversed replication forks, and accumulation of single stranded DNA gaps behind forks. Here, we show that the mono-ADP-ribosyltransferase PARP14 is a critical co-factor of MRE11. PARP14 is recruited to nascent DNA upon replication stress in BRCA-deficient cells, and through its catalytic activity, mediates the engagement of MRE11. Loss or inhibition of PARP14 suppresses MRE11-mediated fork degradation and gap accumulation, and promotes genome stability and chemoresistance of BRCA-deficient cells. Moreover, we show that the KU complex binds reversed forks and protects them against EXO1-catalyzed degradation. KU recruits the PARP14-MRE11 complex, which initiates partial resection to release KU and allow long-range resection by EXO1. Our work identifies a multistep process of nascent DNA processing at stalled replication forks in BRCA-deficient cells.
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